第三节 革兰阳性杆菌

2．查验体例：

分枝杆菌属(terium)

2．分离培养：因为棒状杆菌多数是人类皮肤和黏膜的普通菌群，纯真依托涂片难以终究肯定病原菌，必须经培养确认。

(2)该菌的致病力较结核分枝杆菌低，它而至使的疾病常常停顿迟缓、病程较长，且病灶范围小，症状轻。

(5)药敏：本菌对氯霉索、红霉素和庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺类和呋喃类耐药。

(1)显微镜查抄：1直接涂片查抄：厚涂片，挑取痰或其他措置过的标本约O.lml，涂抹于载玻片上，经天然枯燥和火焰牢固后作抗酸染色，镜检。陈述体例：（一）：全视野（或100个视野）未找到抗酸菌；(+)：全视野发明3~9个；(++)：全视野发明10~99个；(+++)：每视野发明l~9个；(++++)：每视野发明10个以上（全视野发明1~2个陈述抗酸菌的个数）。2稀释集菌涂片查抄：将汇集标本离心，取沉淀涂片，或采取漂泊集茵法，集菌后标本经几次多次涂片使涂层加厚，普通取3~4接种环，涂片面积直径约莫15mm，枯燥牢固后染色镜检。

本菌属归属于放线菌科。棒状杆菌属种类繁多，首要有白喉棒状杆菌(C.diphtheriae)、枯燥棒状杆菌(C.pseudodiphtheriticum)、化脓棒状杆菌(C.pyogenes)、溃疡棒状杆菌(C.ulcerans)、假结核棒状杆菌(C.pseudotuberculosis)、溶血棒状杆菌(C.haemolyticum)、J-K群棒状杆菌(C.jeikeiu group JK)o此中引发人类疾病的主如果白喉棒状杆菌。除白喉棒状杆菌外，其他棒状杆菌多数漫衍在人或植物鼻腔、咽喉部、外耳道、眼结膜、外阴和皮肤等处，为前提致病菌。

3．鉴定：培养24~48h呈现小菌落，粗颗粒样，大要枯燥，涂片染色为革兰阳性纤细分枝菌丝，具弱抗酸性，可开端肯定。星形奴卡菌45C可发展，与其他奴卡菌可辨别。

1．分离培养：将血液标本(3~5ml)或脑脊液的离心沉淀物接种两支脑心浸液（标本量的IO倍）培养基中。此中一支置10%C02环境中，37℃培养24~48h，各作一次血平板分离：另一支置4℃培养，每24h作一次血平板分离：持续4天，今后每周一次至四周。咽喉拭子、构造及粪便接种于肉汤培养基中，置4℃培养，停止冷增菌，转种和培养体例同上。从血平板上挑取有β溶血环的菌落，做涂片染色镜检并进一步鉴定。

(3)分离培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，浅显营养琼脂平板上便可发展。血平板上构成较着的β溶血环，菌落似毛玻璃状。

(1)直接镜检：将可疑质料涂片，构造标本可作压印片，用1:1OOO的升汞牢固5min，再行革兰染色和荚膜染色。镜检发明有荚膜的革兰阳性竹节状大杆菌，可开端诊断。该菌是致病菌中最大的革兰阳性杆菌。荚膜荧光抗体染色，链状或竹节状大杆菌四周有发荧光的荚膜者为阳性。

1．**加特纳菌革兰染色从阳性到弱阳性，普通说来，尝试室保存菌株趋势革兰阳性，新奇临床标本平分离的菌株趋势革兰阳性，在高浓度血清中发展的菌株呈革兰阳性。

(3)抗PPDlgG的检测：用ELISA法检测患者血清中抗PPDlgG抗体可作为活动性结核分枝杆菌传染的快速诊断体例之一。肺结核病人的血清阳性率为80%~90%。

1．标本汇集：采纳可疑食品或汇集腹泻粪便和呕吐物停止查验。除作分离培养外，细菌计数对本菌而至食品中毒有诊断代价，因透露于氛围中的食品均在必然程度上受本菌净化。

咽、喉、鼻咽拭子

产单核李斯特菌(Listeria monocytogenes)

本菌属包含猪红斑丹毒丝菌( E.rhusiopathiae)和扁桃体丹毒丝菌(E.tonsillarum)o猪红斑丹毒丝菌是这个属中独一传染人的一个种。

2．麻风分枝杆菌：是麻风病的病原菌。麻风病是因为细胞免疫缺点，使传染的麻风分枝杆菌大量滋长构成部分肉芽肿而至，可影响皮肤、外周神经，表示为皮肤感受缺失和四周神经增厚。从鼻肉芽肿上脱落的菌体是传播的首要启事，可因密切打仗引发传染。麻风杆菌在体外不能培养。

产单核李斯特菌遍及漫衍于天然界、水、泥土、人和植物粪便中，它附属于李斯特菌属，该属包含8个种，此中只要产单核李斯特菌对人有致病性。人类李斯特菌的首要感染源是安康带菌者，传播路子是粪一口，产单核李斯特菌也可通过胎盘和产道传染重生儿，引发重生儿化脓性脑膜炎、败血症性肉芽肿等，灭亡率较高。与病畜打仗可致眼和皮肤的部分传染。怀胎妇女传染后可引发流产。

丹毒丝菌属（Erysipelothrix）

(6)炭疽杆菌的查验必须由专业处置炭疽杆菌查验的事情职员停止。

猪红斑丹毒丝茵( E.rhusiopathiae)

此中之一为人畜共患菌炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)，另一类为类炭疽芽孢杆菌，包含枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、蜡样芽孢杆菌(B. cereus)、蕈状芽孢杆菌(B．mycoides)、庞大芽孢杆菌等(B.megaterium)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)等。本属细菌中除炭疽芽孢杆菌有荚膜无鞭毛外，其他杆菌均具有鞭毛而无荚膜。营养要求不高，在浅显琼脂平板上发展杰出。类炭疽芽孢杆菌是尝试室内常见的净化菌。炭疽芽孢杆菌对人的致病才气强。

(4)鉴定实验：1串珠实验：炭疽芽孢杆菌在每毫升含0.05~0.5IU青霉素的肉汤培养基中可产生形状变异，构成大而均匀的圆球形并相连如串珠状，而类炭疽及其他需氧芽孢杆菌则无此征象。本实验辨别意义较大。2噬菌体裂解实验。3重碳酸盐毒力实验：将待检菌接种于含0.5%碳酸氢钠和10%马血清琼脂平板上，置lO%C02环境下，37℃培养24~48h，察看菌落形状，有毒力的炭疽芽孢杆菌能产生大量的谷氨酸物质，构成荚膜，菌落呈M型；无毒力芽孢杆菌不构成荚膜，呈R型菌落。4青霉索按捺实验：将待检菌别离接种于含青霉素5、10、lOOu/培养24h，炭疽杆菌普通在含5u/ml的青霉素平板上仍能发展，在含10、lOOu/ml青霉素的平板上遭到按捺而不发展。5植物凝固素实验：近年来有学者按照炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝固素受体的道理，用凝固素实验检测炭疽杆菌。

1．涂片查抄：革兰阳性杆菌，菌体颀长，是非不一，单个存在或构成短链，偶然可构生长丝状，且有分枝及断裂，与放线菌形状类似。

2．普通在诊断细菌性**炎时，常作临床简易实验帮手诊断，不需作分离培养，这是因为无症状的妇女也常可培养出**加特纳菌。患细菌性**炎的妇女**加特纳菌呈100~1000倍增加，提示在细菌性**炎中本菌能够起首要感化。细菌性**炎可导致多种严峻的妇科并发症，如子宫全切术后传染、绒毛膜炎、羊水传染、早产等，还能引发重生儿致死性和非致死性败血症等。

对人类致病的结核分枝杆菌包含人结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌，统称为“结核分枝杆菌复合群”。分歧结核分枝杆菌复合群引发的临床症状类似，医治也不异。我国以人型结核分枝杆菌传染的病发率最高，首要通过呼吸道、消化道和毁伤的皮肤等多路子传染机体，引发多种脏器构造的结核病。此中以肺结核最为多见，开放性肺结核患者咳嗽时排挤颗粒构成气溶胶，当易感者吸入气道达肺中后，此中90℃的菌体可经粘膜纤毛活动而解除，只要一小部分进入肺泡，被肺泡中的巨噬细胞吞噬，因菌体的脂类等成分能抵当溶酶体的感化，故细菌能够在巨噬细胞内滋长，导致巨噬细胞裂解，开释出的结核杆菌可再度被巨噬细胞吞噬，通过巨噬细胞将细菌带至其他部位。这类排泄性炎症，即为原发性传染，原病发灶多见于肺尖、下叶的上部靠近肋膜处，多能自愈，构成纤维化或钙化灶。机体内有潜伏传染灶的人，普通来讲，有l0%能够复发，在传染的最后几年伤害性最高。在AIDs病人中，肺结核多为原发性，停顿敏捷，经血流播散部分的纤维化和干酪样病变较少。93％的从未经医治患者平分离到的结核分枝杆菌对抗结核药物敏感，对两药或三药医治计划反应杰出。但因为产生基因突变，目前2/3以上的临床分离株对多种抗结核药物产生耐药性。

该菌偶尔还引发成民气内膜炎、败血症、结膜炎等。

3．涂片染色镜检：取**分泌物涂片，枯燥后牢固革兰染色，如有革兰染色不定小杆菌及其他革兰阳性杆菌、弧菌或革兰阳性细菌，而革兰阳性大杆菌（乳酸杆菌）贫乏或独一l~5个的异化细菌群，可提示为细菌性**炎。

蜡样芽孢杆菌遍及漫衍于泥土、水、灰尘、淀粉成品、乳及乳成品中，可引发食品中毒，并可致败血症。蜡样芽孢杆菌引发的食品中毒有两种范例：腹泻型和呕吐型。多见于夏春季，引发食品中毒的食品有米饭、乳类、禽畜肉类、生果汁饮料等，中毒食品大多无**变质征象。

需氧芽孢杆菌属(Bacillus)

炭疽芽孢杆菌(B．anthracis)o

(4)鉴定：按照形状、染色、生化反应等作出开端鉴定，以后可作血清学和噬菌体分型。

(2)活菌计数：将汇集的标本用无菌心机盐水稀释成lO^-1~10^-3。1涂布法：取各稀释液O.lml别离接种于卵黄琼脂平板上，用L形玻棒涂布均匀，置35℃孵育12h，本菌在该平板上产生蜡样光芒，易于辨认。2倾泻平板法：取各稀释液O.lml注入空的无菌平皿，将熔化冷至45℃～50℃的营养琼蜡适当倾入并当即混匀，冷凝后置35℃培养24~48h，每个稀释度平行作两个平皿。计数时挑选菌落数在30~300个之间的平板计数。普通以为蜡样芽孢杆菌>10^5个／g或>10^5个／ml时，即有产生食品中毒的能够。

3．查验法度

加特纳菌属(Gardnerella)

1．结核分枝杆菌：是人类分枝杆菌病最首要的病原体，因其胞壁含有大量脂质成分，抵当力强、本事高温、耐枯燥，在枯燥的痰中可存活6~8个月，含有结核分枝杆菌痰液的灰尘可保持8～lOd的感染性。该菌对湿热敏感，60℃半小时、80℃以上5min以内可灭亡在煮沸前提下可完整杀菌，以是对于痰液净化物可通过燃烧灭菌。

(5)鉴定标准：革兰阳性、两端平整、竹节状成双或呈短链摆列，有荚膜的粗大杆菌，或荚膜肿胀实验阳性，串珠实验阳性，重碳酸盐毒力实验呈现M型菌落可作出诊断。

l，标本直接查抄

4．药敏：首选青霉素，然后为红霉素、四环素、林可霉素和磺胺。

奴卡菌属( Nocardia)

蜡样芽孢杆菌(B.cereus)

3．药敏：首选氨苄青霉素，别的青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等也敏感，磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。

1．标本汇集：皮肤炭疽取病灶分泌物；肺炭疽采纳痰液；肠炭疽采纳粪便；炭疽脑膜炎采纳脑脊液。各型炭疽都可采纳血液。

1．腹泻型：由不耐热的肠毒素引发，胃肠炎症状，暗藏期均匀为10～12h．临床表示为腹痛、腹泻和里急后重，偶有呕吐和发热，病程普通为1~2d。

猪红斑丹毒丝菌是红斑丹毒丝菌病的病原，是一种急性感抱病，首要产生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也可传抱病发，但机遇有限，首要因接震植物或其产品经皮肤毁伤而引发类丹毒。以引发部分传染为主，满身传染者少见。偶可激发枢纽炎、心内膜炎和急性败血症。

(1)多产生于机体免疫力低下时，为机遇性传染，患者多为老年根本肺疾病者、利用激素、免疫按捺剂者、AIDS患者等。

炭疽芽孢杆菌首要引发食草植物患炭疽病，也可经必然路子传染人类，为人畜共患的急性感抱病，遍及天下各地，四时都可病发。本菌芽孢体抵当力很强，在枯燥泥土或外相中常温下可存活数十年。普通对碘及氧化剂较敏感。炭疽芽孢杆菌可经皮肤、呼吸道和胃肠道侵入机体引发炭疽病。临床范例有皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽，病死率很高。这三型炭疽都可并发败血症和炭疽性脑膜炎，患者病后可获得耐久免疫力，再次传染很少见。炭疽杆菌是人类已知的微生物中致病性最强的。

(2)核酸检测：用PCR法快速诊断结核分枝杆菌传染。该法特同性和敏感性均大于95%。

2．培养：接种沙氏培养基、血平板都可发展，分歧种类可产生分歧的色素。

(3)植物实验：将标本或培养物制成悬液，皮下接种于豚鼠(1ml)或小白鼠(0.2ml)。都可引发败血症。并于1～3d后灭亡。内脏和血液中存在大量有荚膜的细菌。

本菌属有9个菌种，激发人类奴卡菌病的首要为星形奴卡菌(N.asteroides)、巴西奴卡菌(N.brasiliensis)和鼻疽奴卡菌(N.farcini-ca).我国以星形奴卡菌为主。它们是一类机遇致病菌，其传染常产生于白血病、恶性淋巴瘤、哮喘、支气管扩大、结核病、慢性梗阻性肺部疾病、赤色素沉着症、溃疡性结肠炎、酒精中毒、肝硬化、皮质类固醇医治、接管肾和心脏移植的病人。本菌首要通过呼吸道引发原发性、化脓性肺部传染，可呈现近似结核的症状，并可经血液播散，达到机体任何器官。奴卡氏菌病的病人约莫有1/3患转移性脑脓肿，病人有头痛、癫痫发作、病灶神经缺点或其他神经非常，但是血液和脑脊液培养总不能证明本菌的存在。有些患者痰培养奴卡菌阳性，但没有奴卡氏菌病的临床证据，星形奴卡菌能够是呼吸道的普通菌群，是以分离物存在的意义有赖于临床诊断。巴西奴卡菌常引发皮下传染，常常累及的部位是足部和腿部，故称足分枝菌病( a)，本病常产生在南美洲、拉丁美洲，墨西哥也有产生。

需氧芽孢杆菌属是一群需氧、能产生芽孢的革兰阳性大杆菌。

**加特纳菌(G．vaginalis)是加特纳菌属中独一的一个菌种。

别的，结核分枝杆菌对紫外线抵当力差，日光直射4h便可灭亡。固然在70%~75%乙醇中数分钟即被杀死，但因为乙醇能使痰中的蛋白质凝固，是以不宜用于痰的消毒。

3．鉴定：触酶阳性，克氏双糖管中产硫化氢，分化阿拉伯糖，动力阳性。

2．鉴定：触酶阳性，在血琼脂上有狭小的β溶血环可在4℃冷增菌发展，25℃有动力，37℃无动力或动力迟缓。CAMP实验阳性。

2．直接湿片镜检：取**分泌物加一滴或数滴心机盐水异化涂片，在高倍镜下察看，细菌性**炎患者可见大量**上皮细胞，少量脓细胞及无数成簇的小杆菌聚集或吸附于上皮细胞大要，导致细胞边沿暗淡，呈锯齿形，即为线索细胞，提示**加特纳菌传染。

(2)其他棒状杆菌：多数是人类皮肤和黏膜的普通菌群。但近年来，因为大量利用免疫按捺剂和当代化查抄手腕，如心导管术等，使这些前提致病菌可致病院内传染，引发构造和血行传染，包含菌血症、心内膜炎、骨髓炎等。

(1)白喉棒状杆菌：是感抱病白喉的病原菌，感染源为患者及带菌者，首要以飞沫或净化的物品传播。该菌首要以所产生的激烈外毒素致病。白喉棒状杆菌存在于白喉患者的咽头气管及鼻腔的粘膜，几近呈纯培养状况。别的偶然于皮肤、结膜、女性**及浅表性创伤传染部位也可见到。

(6)肺部症状与X线表示程度不符，非结核分枝杆菌引发的肺部传染症状较轻，但胸片可表示为遍及的病灶。

本菌属归属于放线菌科。已发明的分枝杆菌有100多种，遍及漫衍于泥土、水、人体和植物体内，首要引发肺部病变，尚可引发满身其他部位的病变，常见的有淋凑趣炎、皮肤软构造和骨骼体系传染，对严峻细胞免疫按捺者还可引发血源性播散。临床将分枝杆菌分为结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、麻风杆菌及腐物寄生性分枝杆菌（无致病性）：

2．分离培养：固体培养基培养法和液体培养基培养法。

1．压片查抄：将构造或排泄液等标本置于玻片上革兰染色镜检，可发明菊花状物，但末端不膨大，革兰阳性，抗酸弱阳性。本菌在脑脊液、脓胸穿刺液及痰中不构成菊花状物。

临床标本汇集、措置的重视事项

(5)对抗结核药具天然的耐药性，临床疗效不佳。

1．**加特纳菌是引发非淋菌性**炎的首要病原菌之一，其诊断根据是：**排挤物增加，淡薄、均质、灰红色，有恶臭味，PH>4.5；有线索细胞，即**上皮细胞被革兰阳性小杆菌覆盖；胺实验阳性：10%KOH滴到**分泌物上，当即呈现鱼腥味和氨味。

2．肺炭疽：传染后12h便可呈现症状。初期近似感冒，然后俄然高热、寒噤、胸痛、出血，咳血性痰，很快呈现呼吸衰竭，中毒性休克灭亡。

4．药敏：对青霉素、头孢菌素、红霉素和四环素等均敏感。

3．非结核分枝杆菌(NTM)：NTM属于环境分枝杆菌，首要来源于污水、泥土、气溶胶。风行病学显现NTM的传染率日趋上升。非结核分枝杆菌传染具有以下特性：

2．分离培养：初度分离要在厌氧环境下，传代后可在有氧环境中发展，在含有葡萄糖或血液的培养基中发展较好。

1．皮肤炭疽：较多见，约占95%，多发于透露的皮肤部位，卜2d呈现症状，开端似蚊虫叮咬一样的痒，然后呈现斑疹、疱疹、严峻水肿，继而构成无痛性溃疡，中间有血性排泄物并结成黑痂。常伴随部分淋凑趣肿大、发热、头痛，并发败血症，可产生中毒性休克。

异染颗粒染色） 涂片染色镜检生化反应毒力实验用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边沿汇集分泌物，未见假膜的疑似患者或带菌者可汇集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。如做培养，应在利用抗生素或其他抗菌药品前汇集标本。如不能当即送检，应将标本浸于无菌心机盐水或15%甘油盐水中保存。普通该标本应由临床专科医师汇集。

4．药敏：结核分枝杆菌耐药株的增加使结核病成为威胁人类安康的一大杀手。结核分枝杆菌菌株应做药敏实验，以指导临床公道用药。

1．涂片查抄：将检材直接制成两张涂片，别离作革兰染色和异染颗粒染色，镜检如呈现革兰阳性棒状杆菌，形状典范具较着异染颗粒，立便可作“直接涂片检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌”的开端陈述，供临床参考。

(4)可与结核分枝杆菌归并传染，多见于有浮泛的结核患者身上。

(2)分离培养：普通标本接种血平板，37℃培养24h察看菌落特性。净化严峻的标本可预先加热至65℃30min杀灭杂菌，或接种炭疽杆菌挑选培养基――戊烷脒琼脂平板，培养时候稍长，菌落特性与血平板培养基的发展类似，但菌落较小。为进步检出结果，可选用2%兔血清肉汤增菌，然后分离培养。

2．呕吐型：由耐热的肠毒索引发，于进餐后1~6h病发，患者都有恶心和呕吐，仅部分有腹泻，病程均匀不超越lOh。

(3)多归并有人类免疫缺点病毒传染，NTM是AIDS的首要机遇致病菌，最常见的传染是鸟一孢内分枝杆菌。

棒状杆菌属(Corynebacterium)

3．肠炭疽：传染后普通12―18h呈现症状。首要为急性胃肠炎表示，恶心、呕吐、腹痛、发热、血性水样便，因中毒性休克灭亡。

(1)涂片镜检：将汇集的标本用无菌心机盐水制成菌悬液，直接涂片，革兰染色镜检。

4．药敏：统统菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对奈啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺耐药。

2．查验体例及鉴定：炭疽杆菌的查抄要特别重视芽孢型的尝试室传染，故应有专门防护的尝试室，并对用过的器具、检材等停止严格的消毒措置。

3．鉴定：PCR反向膜探针杂交ELISA法；DNA探针；16srRNA基因序列测定；高效液相色谱(HPLC)检测分枝菌酸。